Activation of NF-(kappa)B by TNF(alpha) in human chondrosarcoma HCS-2/8 cells

Abstract

Chondrocytes play a central role in the homeostasis of cartilage by controlling the synthesis and degradation of cartilage matrix. In inflammatory arthritis, cytokines such as Tumor Necrosis Factor-(alpha) (TNF(alpha)) stimulate chondrocytes to destroy the articular cartilage. However, the intracellular signaling pathway for TNF(alpha) in chondrocytes has not been studied in detail. The question whether TNF(alpha) activates NF-(kappa)B in human chondrocyte-like cells (HCS-2/8) was thus investigated. Electrophoretic mobility shift assay revealed that a 1-hr treatment with various doses of TNF(alpha) induced the activation of NF-(kappa)B in a dose-dependent manner. This NF-(kappa)B was demonstrated to consist of p50-p65 heterodimer by supershift analysis using specific antibodies against various NF-(kappa)B subunits. These results suggest that the p50-p65 heterodimer NF-(kappa)B plays an important role in mediating the action of TNF(alpha) in chondrocytes.

軟骨細胞は軟骨マトリックスの合成および分解を調節することにより、軟骨の恒常性に中心的な役割を果たしている。炎症性関節炎において、腫瘍壊死因子(TNF(α))などのサイトカインは軟骨細胞を刺激して関節軟骨を破壊する。しかしながら、軟骨細胞内のTNF(α)に関するシグナル伝達経路の詳細は研究されていない。著者らはヒト軟骨細胞様細胞(HCS-2/8)においてTNF(α)がNF-(κ)Bを活性化するか否かを研究した。電気泳動度シフトアッセイはTNF(α)の種々の用量による1時間処理が用量依存性にNF-(κ)B活性化を誘発することを明らかにした。種々のNF-(κ)Bサブユニットに対する特異的抗体を用いるスーパーシフト分析により、NF-(κ)Bはp50-p65ヘテロ2量体から構成されていた。これらの結果は、p50-p65ヘテロ2量体NF-(κ)Bが軟骨細胞におけるTNF(α)の作用仲介に重要な役割を持つことを示唆する。