Evaluation of optimal solution to retrieve antigenicity using microwave treatment

Abstract

Studies have been conducted to find a suitable method to retrieve antigens in brain formalin-fixed samples that have been stored over two years. Based on the antigen retrieval microwave heating technique, the effect of solutions used for the retrieval, namely distilled water, 0.05 M Tris buffer (pH 9.2) and 0.01 M sodium citrate buffer (pH 6.0), was compared. The microwave oven heating in distilled water greatly improved the antigenicity for Type 1 metabolic Glutamate Receptor (mGluR1), Synaptophysin (SY) and Neurofilament (NF), but not for Inositol 1,4,5 Triphosphate Receptor (IP3R), which showed weak staining. In 0.05 M Tris buffer (pH 9.2), greatly improved immunostainings were observed in all 4 antigens. However, significantly increased background noise was also noted. In 0.01 M sodium citrate buffer (pH 6.0) the retrieval was successful for IP3R, mGluR1 and SY, but the retrieval for NF was imperfect. The present results thus indicate that solutions are important for antigen retrieval using microwave oven heating, and that optimal solutions are different among antigens.

本研究では、2年間にわたり保存したホルマリン固定脳サンプル中の抗原検索に適した方法を検討している。抗原検索マイクロ波加熱法に基づき、回収に使用する溶剤、すなわち蒸留水、0.05MのTris緩衝液(pH9.2)、0.01Mのクエン酸ナトリウム緩衝液(pH6.0)の効果を比較した。サンプルを蒸留水中でマイクロ波オーブン加熱したところ、1型代謝グルタミン酸レセプタ(mGluR1)、シナプトフィシン(SY)、ニューロフィラメント(NF)の抗原性は大きく増加したが、イノシトール1,4,5 3リン酸レセプタ(IP3R)の抗原性は増加せず、染色反応は弱かった。0.05MのTris緩衝液(pH9.2)では、4種の抗原すべてで強い免疫染色反応が認められた。しかし、暗騒音の顕著な増加も認められた。0.01Mのクエン酸ナトリウム緩衝液(pH6.0)では、IR3R、mGluR1、SYの検索は良好であったがNFについては不完全であった。この結果から、マイクロ波オーブン加熱を使用した抗原検索には溶剤が重要であること、適する溶剤は抗原により異なることがわかった。