Inhibition of Glutathione S-Transferases (GST) by Ethacrynic Acid (EA) impairs growth of human adrenocortical cells

Abstract

Glutathione S-Transferases (GST), members of the intracellular detoxifying enzymes, are abundantly expressed in the adrenal cortex. However, the exact function of these enzymes in the adrenocortical cells is yet to be elucidated. Several studies have shown that GSTs are involved in the proliferation of various cell lines. Therefore, the role of GSTs in cell growth in the H295R human adrenocortical cell line was evaluated. The cells were treated with a specific GST inhibitor, Ethacrynic Acid (EA), for one to eight days, and cell growth was determined by WST assay. The cells in the control group were observed to grow exponentially. Treatment with 10 micro-M EA inhibited the increase in the cell number from that of the initial plating, indicating that this dose is cytostatic to the cells. EA, at 20 and 30 micro-M concentrations, was cytostatic for the first two days of culture after which was cytotoxic. Fifty (50) micro-M EA was cytotoxic from the beginning. Thus, GSTs are concluded to be important for cell growth and cell survival.

グルタチオンS-トランスフェラーゼ(GST)は細胞内解毒酵素の1種であり、副腎皮質で大量に発現する。しかし、本酵素群の副腎皮質細胞における確かな機能はまだ解明されていない。いくつかの研究では、GSTが様々な細胞株の増殖に関与していることを示している。したがって本研究では、H295Rヒト副腎皮質細胞株の細胞増殖におけるGSTの役割を検討した。GST特異的阻害体であるエタクリン酸(EA)を用いて上記細胞を1?8日間処理し、WST法にて細胞増殖を測定した。対照群の細胞は幾何級数的に増殖したが、10マイクロMのEA処理は初期培養からの細胞数増加を抑制し、本濃度で副腎皮質細胞に対する増殖抑制性を示すことがわかった。20マイクロMおよび30マイクロMのEAは、培養当初の2日間は細胞増殖抑制的であり、その後細胞毒性を示した。50マイクロMのEAは最初から細胞毒性を示した。この結果からGSTは細胞の増殖および生存に重要な役割を果たしていると結論した。